人乳头状瘤病毒16型E7基因重组腺相关病毒载体的构建及E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达

• 作者: 周晖 张丙忠 张娟 彭永排 杨清元 林仲秋
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 依赖病毒 遗传载体 癌基因蛋白质类,病毒性 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 480-483
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 2956字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-567X.2005.07.014

摘要

目的构建含人乳头状瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.方法将含腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列及HPV16E7基因的重组质粒pAAV-MCS-E7、含rep/cap基因的质粒pAAV-RC及辅助质粒pAAV-helper共同转染胚胎肾细胞系HEK293细胞,回收、纯化病毒颗粒并鉴定,斑点杂交法测定病毒滴度, RT-PCR技术、蛋白印迹法验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.结果电镜鉴定结果显示真核细胞中有病毒颗粒存在,斑点杂交法测定病毒滴度为1×1011/ml.含HPV16E7基因的rAAV载体转染真核细胞后, 在细胞内可检测到HPV16E7 mRNA和蛋白的表达.结论本实验成功构建了含HPV16E7基因的rAAV载体,经验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞内有表达.