大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离和培养

• 作者: 王宜强 王瑶 董晓光 陈楠 陈焓
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 内皮细胞 视网膜 微血管
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 396-399
• 页数: 4页
• 分类号: R774.1
• 字数: 4706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2005.05.003

摘要

目的探讨大鼠视网膜毛细血管内皮细胞(rat retinal capilla ry endothelial cells,RRCEC)的体外分离和选择性培养方法.方法采用单纯视网膜剪碎法获得的视网膜微血管碎片,结合0.25%胶原酶消化,经细胞筛网过滤,原代细胞悬液接种于纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)包被的培养皿中,培养液为含 20%胎牛血清 (FBS)、100×103 U·L-1肝素钠、10 mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)的DMEM液. 原代培养5～6 d细胞较少时,采用机械除杂法进行细胞分离,而在传代时利用进行选择性消化和贴壁法除杂分离以获得较纯RRCEC.应用Ⅷ因子相关抗体通过免疫组化方法对所培养的R RCEC进行鉴定. 结果大鼠视网膜组织经过胶原酶适当消化后,产生大量具有良好生长能力的微血管碎片,贴壁后可见RRCEC自微血管碎片中游出,融合后呈铺路石样单层生长.传代培养时5～6 d可融合生长.选择性培养获得的RRCEC纯度高,能连续传代,保持性状不变. 对Ⅷ因子相关抗体染色阳性. 结论视网膜剪碎、胶原酶、FBS、bFGF、培养皿处理及机械除杂法分离,选择性消化和贴壁等应用可获得较纯的RRCEC,方便简单,具有良好的重复性.