构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3及其在脐血CD34+细胞中的表达

• 作者: 张勇 张林生 张红宾 裴莉 郭朝华 钟大平
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 抗原 CD34 质粒 转染
• 年，卷（期）: 2005,（42）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 4-5,25
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5051字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.42.002

摘要

目的:构建真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3配体,为研究Flt3配体对急性放射复合伤造血功能恢复作用提供实验物质基础.方法:实验于2003-05/09在第三军医大学劳动卫生教研室完成.先用SalⅠ和BglⅡ双酶切pUMVC3-hFLT3配体,得到全长的人FLT3配体序列(0.8kb),两端抹平后克隆至pIRES2-EGFP载体的BglⅡ位点.然后用NheⅠ和XhoⅠ酶切鉴定;最后用脂质体转染的方法将重组质粒转入脐血CD34+细胞中,经过G418筛选,在荧光显微镜下观察其表达.结果:①构建了双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-FLT3.②重组质粒pIRES2-EGFP-FLT3能在脐血CD34+细胞中的表达,凝胶电泳和测序结果证明将FLT3 cDNA亚克隆入pIRES2-EGFP内,荧光显微镜下可见脐血CD34+细胞胞体发出绿色荧光.③转染效率为10.3%.结论:①携带标记基因的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-FLT3能稳定地转入真核细胞表达载体.②该质粒转染到分离纯化的脐血CD34+细胞中,并获得阳性转染细胞的克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张勇	解放军第三军医大学西南医院血液科	120	550	12.0	18.0
2	张红宾	解放军第三军医大学西南医院血液科	23	165	8.0	12.0
3	裴莉	解放军第三军医大学西南医院血液科	5	18	2.0	4.0
4	郭朝华	解放军第三军医大学全军复合伤研究所	2	6	1.0	2.0
5	钟大平	解放军第三军医大学西南医院血液科	5	8	1.0	2.0
6	张林生	解放军第三军医大学西南医院血液科	1	1	1.0	1.0