逆转录病毒载体介导的LacZ基因在NIH-3T3细胞中的稳定表达

• 作者: 安铁洙 岳占碰 张学明 成军 李德雪 杜崇涛 柳巨雄 邓旭明 高丰
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: LacZ基因 逆转录病毒载体 NIH-3T3细胞
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 124-127
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 930字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2005.02.003

摘要

精原干细胞(SSCs)介导的转基因技术很可能成为制作转基因动物及治疗雄性不育的一条新途径.为了研究逆转录病毒载体介导法转染体外培养SSCs的可行性,用脂质体介导法将携带LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLNCL导入包装细胞PA317,用含G418的培养液筛选得到5株稳定转染的产毒细胞.收集这些克隆的产毒上清,过滤后进行倍比稀释,用NIH-3T3细胞通过X-gal染色测定其浓缩前病毒滴度.结果显示,PA3173培养上清中病毒的浓缩前滴度最高,达1.1×103CFU/mL.再将筛选到的稳定转染的NIH-3T3细胞培养至单层,进行X-gal染色检测β-半乳糖苷酶的表达.结果显示,大多数稳定转染的NIH-3T3细胞均为X-gal+,表明这些细胞成功表达了目的基因LacZ.本研究结果为后期工作中用该载体感染体外培养SSCs奠定了基础.