鸡类胰岛素生长因子Ⅰ的克隆、表达及其表达产物的生物学活性研究

• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 类胰岛素生长因子Ⅰ基因 原核表达 MTT法
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 2129-2133
• 页数: 5页
• 分类号: S85
• 字数: 4152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2005.10.027

摘要

应用RT-PCR方法对雏鸡肝脏总RNA中鸡类胰岛素生长因子Ⅰ基因cDNA进行扩增,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,与已知序列同源性为100%.然后将特异性片段连在pRLC载体上进行表达,经Tricine-SDS-PAGE分析,原核表达产物为7.6 kD的重组蛋白,占菌体总蛋白的23%,Western印迹表明重组蛋白具有IGF-Ⅰ抗原活性.表达产物以包涵体形式存在,经7 mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及0.5 mol·L-1精氨酸复性液处理,表达产物随后进行脱盐、凝胶层析纯化、MTT法分析其对NIH3T3和鸡胚成骨细胞的增殖效应,结果表明重组鸡IGF-Ⅰ具有较高的生物学活性.