小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒载体介导的离体hFⅨ基因表达

• 作者: 姚恒美 沈琦 薛京伦 贾韦国 陈浩明 黄璐
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 单个核细胞 Lin-CD117+造血干细胞 重组慢病毒载体 人凝血因子Ⅸ
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 页码范围: 503-506,523
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 2664字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0427-7104.2005.04.005

摘要

造血干细胞是基因治疗理想的靶细胞之一,尤其适用于遗传性血液病.而重组慢病毒载体能高效感染造血干细胞,成为造血干细胞途径基因治疗的理想载体.从小鼠骨髓细胞中分离出单个核细胞(MNCs)进行体外悬浮培养,并用免疫磁珠法分离得到高纯度的小鼠Lin-CD117+造血干细胞(HSCs).体外悬浮培养期间,添加细胞因子的造血干细胞的细胞数和集落数逐渐增加,而未添加细胞因子的对照组的细胞数量无明显增加,细胞集落递减.用磷酸钙介导的共转染法制备了携带FⅨ基因的FUXW重组慢病毒,用慢病毒载体分别感染从ICR小鼠和C57小鼠中分离得到的MNCs,7 d后测得细胞上清中hFⅨ的表达量分别为41.7±4.2和34.5±6.6ng/mL,而慢病毒感染C57小鼠造血干细胞,添加细胞因子组上清中hFⅨ的表达量为46.6±5.7 ng/mL,不添加细胞因子组为33.3±4.8 ng/mL.实验结果表明,重组FUXW慢病毒载体可有效感染小鼠单个核细胞和Lin-CD117+造血干细胞,添加细胞因子可提高转移基因的表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚恒美		1	2	1.0	1.0
2	陈浩明		1	2	1.0	1.0
3	黄璐		1	2	1.0	1.0
4	沈琦		1	2	1.0	1.0
5	贾韦国		1	2	1.0	1.0