利用斑点免疫渗滤法(DIFA)检测伤寒抗体的方法学研究

• 作者: 张美娟 彭丹 王钦富 陆继辉 韩慧
• 来源期刊: 中国医学检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 伤寒 诊断 斑点免疫渗滤法
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 182-184
• 页数: 3页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文

摘要

[目的]利用斑点免疫渗滤法(DIFA)检测伤寒抗体,并探讨临床诊断价值.[方法]采用斑点免疫渗滤法(DIFA)检测伤寒的菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原及甲、乙副伤寒的鞭毛(H)抗原的特异性抗体,用以诊断伤寒和副伤寒.通过抗原及相应抗体的制备,完成最佳实验条件的确定,包括对硝酸纤维素膜(NC)上抗原的包被时间、包被浓度、包被体积,待检血清的加样量,酶标SPA的最佳工作浓度,显色剂的量及结果的判定,最终确定斑点免疫渗滤法(DIFA)的操作过程为抗原包被为2μl,浓度为200亿/ml,放置4℃冰箱18～24h备用.用小牛血清封闭,待检血清加样量为10μl,待渗滤后洗3次,加酶标SPA10μl,待渗滤后洗3次,加底物10μl,5～10 min观察结果.用确定好的DIFA法检测临床标本(15例阳性血清,36例阴性血清),并与肥达反应相比较.[结果]15例阳性血清DIFA法检测阳性率15/15(100%),而肥达反应阳性率为10/15(66.7%).36例阴性对照血清DI-FA法检测假阳性率1/36(2.8%),肥达反应检测假阳性率4/36＜11.1%),说明DIFA法敏感性和特异性优于肥达反应.[结论]DIFA有较高的敏感性和特异性,且操作简单、快速、无需特殊设备,易于临床推广.