重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 刘继彦 刘霆 吴扬 杨莉 牛挺 田聆 胡兵 贾永前 魏于全
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮细胞生长因子 重组蛋白质 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 301-304
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.03.001

摘要

目的构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定.方法首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体pET-xVEGF和pET-mVEGF.筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白质表达.表达产物经Ni-NTA亲合层析及肠激酶特异性酶切进行分离纯化,最后用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法进行鉴定. 结果限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定等显示目的基因片段和阅读框架正确无误,表明非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体pET-xVEGF和pET-mVEGF构建成功.重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,分离纯化的表达产物xVEGF和mVEGF的纯度达到95%以上,其相对分子质量与预期值一致.抗小鼠VEGF抗体可特异性识别xVEGF和mVEGF.结论重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、分离纯化及鉴定成功,为进一步研究异种VEGF蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础.