利用报道基因检测鼻咽癌细胞的RNA干扰作用

• 作者: 任彩萍 冯湘玲 姚开泰 尹志华 李峰 杨旭宇 蒋卫红
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 RNA干扰 绿色荧光蛋白 荧光素酶
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 371-375
• 页数: 5页
• 分类号: R739.63
• 字数: 3549字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2005.03.024

摘要

背景与目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)具有高效特异阻断基因表达的特点,在基因功能研究、信号转导通路的研究以及基因治疗中得到很广泛的应用.本实验通过体外转录合成siRNA和构建表达shRNA的质粒载体两种方法,检测鼻咽癌细胞系的RNAi作用,建立一个较完善的RNAi技术平台.方法:体外转录合成或通过pSUPER.retro构建表达针对GFP和荧光素酶的siRNAs或shRNAs,将它们和报道基因一起瞬时转染HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞,用荧光显微镜和Western blot检测GFP表达情况;用荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性.结果:3'末端带UU突出的siGFP2和psGFP能特异性地抑制细胞中GFP的表达,而单链反义RNA和3'末端不带UU突出的siGFP1无此作用.定量荧光素酶活性分析发现,siLuc能抑制HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞中荧光素酶的表达,其抑制率分别达到91.43%,78.01%,90.30%和62.85%.HeLa细胞瞬时转染psLuc后,荧光素酶的表达抑制率可达到78.22%.结论:体外转录合成的siRNA和表达shRNA的质粒均能诱发RNAi效应.3'UU突出末端在siRNA诱发的RNAi中起作用.鼻咽癌细胞与HeLa细胞一样存在RNAi效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋卫红	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	91	586	13.0	20.0
2	杨旭宇	中南大学肿瘤研究所	6	45	4.0	6.0
3	姚开泰	中南大学肿瘤研究所	32	173	7.0	12.0
4	任彩萍	中南大学肿瘤研究所	21	135	6.0	11.0
5	李峰	中南大学肿瘤研究所	35	289	11.0	16.0
6	冯湘玲	中南大学肿瘤研究所	22	93	6.0	9.0
7	尹志华	广东医学院附属深圳福田医院香蜜湖分院风湿病研究所	12	64	5.0	7.0