用酵母双杂交系统筛选泛素/核糖体蛋白S27a

• 作者: 刘新光 梁念慈 梁景耀 陈碧 黄功华
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素 核糖体蛋白S27a α'催化亚基 蛋白激酶CK2 人类 酵母双杂交系统 相互作用蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 40-46
• 页数: 7页
• 分类号: Q55
• 字数: 5116字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2005.01.008

摘要

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用.CK2在多种白血病细胞中的活性比相应的正常组织高2～8倍,且CK2的变化与肿瘤的生长情况相关.为研究其在白血病细胞中的作用机制,本研究拟利用酵母双杂交系统从自行构建的HL-60细胞cDNA文库中筛选出与蛋白激酶CK2α'亚基相互作用的蛋白.方法:通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pTHCK2A',获得人CK2α'亚基编码区cDNA;将Pst I/Nde I双酶切的PCR产物连接到同样酶切的"诱饵"载体pGBKT7,构建酵母双杂交穿梭表达质粒(BD质粒),经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH109以排除自主激活.从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA,以酵母穿梭表达质粒pGADT7-Rec为载体,采用CLONTECHSMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库,文库质粒为AD质粒.将上述构建成功的BD质粒、AD质粒共转染感受态酵母菌AH109,进行酵母双杂交实验.以筛选真阳性克隆(即与人蛋白激酶CK2α'相互作用的蛋白).结果:经过酵母双杂交实验,筛选出 6种与蛋白激酶CK2α'相互作用蛋白,核酸序列分析及同源性检索表明,其中1个与泛素/核糖体蛋白S27a有高度同源性(99.8%).结论:用酵母双杂交方法可以从HL-60细胞中筛选出一种与人蛋白激酶CK2α'相互作用的蛋白--泛素/核糖体蛋白S27a.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	刘新光	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	166	878	14.0	23.0
3	黄功华	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	11	80	5.0	8.0
4	梁景耀	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	12	97	6.0	9.0
5	陈碧	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	34	122	7.0	9.0