水牛体细胞核移植方法的研究

• 作者: 潘红平 石德顺 陆凤花 韦英明
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水牛 体细胞 核移植 电融合
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 127-132
• 页数: 6页
• 分类号: S814.8|S823
• 字数: 4743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2005.02.005

摘要

探讨电融合参数对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞,在含有5 μg/mL细胞松弛素的操作液中进行去核,然后将经0.1 mg/L Aphidicolin (APD)处理1 d, 再用0.5% FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞注射到去核的卵母细胞卵周隙中,再经电融合形成重构胚.重构胚经5 μmol/L离子霉素激活处理5 min并在2 mmol/L的6-DMAP中培养3 h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30 μL)培养7～9 d,观察其卵裂和胚胎发育情况.当电融合的电场强度为1 500 V·μs/mm(电压100 V/mm×脉时15 μs)时,电脉冲3次,颗粒细胞核移植的融合率为74.18%,分裂率为71.82%,囊胚发育率为10%,融合率显著高于2次电脉冲(52.03%,P<0.05),卵裂率显著高于4次电脉冲(53.95%,P<0.05);当电脉冲次数为3次时,电场强度为2 000 V·μs/mm的分裂率(53.54%)显著低于1 500 V·μs/mm,2 500 V·μs/mm的融合率(62.0%)和分裂率(53.23%)均显著低于1 500 V·μs/mm(P<0.05).采用耳皮成纤维细胞作供核的融合率(59.75%)和分裂率(57.45%)均显著低于颗粒细胞.染色体组型分析显示,66.7%的核移植胚胎具有正常的供体细胞二倍体核型.将来自1头22岁的摩拉公牛耳皮成纤维细胞的2枚冻胚移植给受体母牛,妊娠到215 d时发生流产.结果表明,高龄水牛的体细胞核移植胚胎能发育到妊娠晚期;水牛体细胞核移植的适宜电融合参数为100 V/mm,15μs,3次电脉冲;颗粒细胞的电融合核移植效果优于耳皮成纤维细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石德顺	广西大学动物繁殖研究所	241	1058	14.0	21.0
2	韦英明	广西大学动物繁殖研究所	82	420	10.0	16.0
3	潘红平	广西大学动物繁殖研究所	59	251	8.0	12.0
4	陆凤花	广西大学动物繁殖研究所	61	253	9.0	13.0