BDNF的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定

• 作者: 于娜 何玲 孔雪 张峪涵 徐坚 杨磊 罗星 黄瑾
• 来源期刊: 农垦医学
• 学科: 生物学
• 关键词: BDNF 酵母双杂交 诱饵质粒
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 329-331
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2258字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1127.2005.05.001

摘要

目的:构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础.方法:用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与plexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株.结果:成功构建pLexA-BDNF重组质粒.转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op-LacZ)酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16h后,OD600均值均为0.9±0.1.这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.结论:构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选.