用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质

• 作者: 孙文改 李季伦 涂然 管乐 陈三凤
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴西固氮螺菌 酵母双杂合系统 PAS结构域 NifA蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 540-545
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 字数: 5985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2005.06.007

摘要

利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将nifA基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-nifA, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-nifA为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1～1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的fhuE基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李季伦		49	572	13.0	22.0
5	陈三凤		2	45	2.0	2.0
9	管乐		1	2	1.0	1.0
10	涂然		1	2	1.0	1.0
11	孙文改		1	2	1.0	1.0