人血小板膜糖蛋白VI胞外区片段的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 万文徽 屈晨雪 李传保 武淑兰 王建中
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血小板 糖蛋白Ⅵ 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 1068-1071
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 字数: 3710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2005.10.033

摘要

目的探讨在原核细胞中表达人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)胞外区片段,制备其多克隆抗体.方法采用PCR技术扩增人血小板GPVI胞外区片段123 aa～268 aa的基因序列,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达.表达产物经亲和层析法纯化及鉴定后,免疫家兔制备多克隆抗体.采用已知单克隆抗体进行ELISA双抗夹心法、Western blot和流式细胞术鉴定其特异性.结果构建的重组质粒经酶切和测序证实序列正确.经诱导表达在相对分子量为4 200处有一条明显融合蛋白条带,Western blot分析证实与预期值一致.所得的抗血清效价为1∶ 128,ELISA双抗夹心法检测表明,所制抗体识别血小板GPVI分子.Western blot和流式细胞术检测结果显示所制抗体可与血小板裂解液中及血小板膜表面GPVI分子发生特异性免疫反应.结论利用原核细胞表达的人血小板GPVI分子胞外区片段能有效地诱发动物产生多克隆抗体,所得抗体与人血小板上GPVI分子特异性结合,为深入研究GPVI分子提供了工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建中	北京大学第一医院检验科	66	632	14.0	22.0
2	武淑兰	北京大学第一医院检验科	26	189	8.0	13.0
3	屈晨雪	北京大学第一医院检验科	50	223	9.0	12.0
4	万文徽	北京大学第一医院检验科	8	38	3.0	6.0
5	李传保	北京大学第一医院检验科	5	18	3.0	4.0