人基质金属蛋白酶-2纤维连接蛋白样片段的原核表达及单抗制备

• 作者: 沈飞 胡晓慧 董宁征 蒋菊香 阮长耿
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: MMP-2 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 27-30,62
• 页数: 5页
• 分类号: R977.3
• 字数: 3757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2005.01.009

摘要

目的在体外原核表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)纤维连接蛋白样片段,制备抗MMP-2特异性的单克隆抗体.方法体外掊养EA hy926内皮细胞,收集细胞后抽提总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得纤维连接蛋白样片段cDNA,与PET20b(+)表达载体重组后转化大肠杆菌BL21(DE3)plus,挑选阳性克隆后,经IPTG诱导表达蛋白.蛋白经次氮基三乙酸镍琼脂糖(Ni-NTA agarose)柱纯化浓缩后免疫Balb/c小鼠,尾静脉加强后取脾细胞融合,ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水.结果原核表达MMP-2纤维连接蛋白样片段大小为21 kd,表达量占菌体总蛋白25%,经Ni-NTA agarose柱纯化后,获得了部分纯化的蛋白.小鼠脾细胞与杂交瘤细胞融合后筛选获得1株单克隆抗体.结论抗MMP-2特异性抗体的获得为MMP-2测定提供了一个有效工具,为进一步研究MMP-2的功能及探讨MMP-2在实体瘤及血液肿瘤发病过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董宁征	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	42	164	7.0	11.0
2	沈飞	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	22	56	3.0	6.0
3	阮长耿	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	188	746	13.0	17.0
4	胡晓慧	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	20	68	5.0	8.0
5	蒋菊香	苏州大学医学院生物化学教研室	17	119	6.0	10.0