人类胰岛素生长因子Ⅰ基因的合成、表达与纯化

• 作者: 余榕捷 李志英 洪岸 高媛
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛素样生长因子1 融合蛋白类 因子Xa 基因 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 260-265
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4300字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2005.02.012

摘要

目的:实现含人类胰岛素生长因子Ⅰ(hIGF-1)融合蛋白的高水平可溶性表达和纯化,应用factor Xa获得非融合的hIGF-1,并对提高目的融合蛋白对factor Xa的敏感性进行探索.方法:根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成编码70个氨基酸的hIGF-1基因,克隆到表达载体pET-35b(+),实现hIGF-1与纤维素结合域(cellulosebinding domain,CBD)的融合表达,并在两者之间引入factor Xa的识别位点,同时尝试在factor Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽(Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly),比较factor Xa酶切效率.纤维素亲和层析纯化融合蛋白CBD-IGF,经Western blotting检测后,利用MTT法测定其促进NIH3T3细胞增殖的活性.结果:可溶性融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中高效表达;活性测定结果显示所纯化的融合蛋白具有促进3T3细胞增殖的活性.在factor Xa识别位点前引入柔性短肽后提高了融合蛋白对factor Xa的敏感性.结论:实现有活性的融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中可溶性的高效表达,为高效制备hIGF-1基因工程产品奠定了基础.此外,在factor Xa识别位点前引入柔性短肽有效提高融合蛋白CBD-IGF对factor Xa的敏感性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李志英	暨南大学生物工程研究所	13	69	4.0	8.0
2	高媛	暨南大学生物工程研究所	9	16	2.0	3.0