高效化学转化菌内同源重组法构建重组腺病毒

• 作者: 佟惠春 尹冰楠 李光明 李冬田 李秋香
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 胸苷激酶 胞嘧啶脱氨酶 腺病毒科 肿瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 437-440
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2005.07.015

摘要

目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础.方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚:氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用电穿孔转化法和化学转化法将线性穿梭质粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内实现同源重组;将重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂质体介导至293细胞中进行包装、扩增.结果:采用切胶回收化学转化法获得阳性重组率最高(100%).经PCR、酶切以及测序等方法鉴定,证实融合自杀基因已成功插入腺病毒中.结论:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒的方法进行了改进,在降低实验成本的同时获得了较原法更高的阳性重组率,并成功构建了复制缺陷性重组腺病毒rAd-CDglyTK.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	佟惠春	天津医科大学医学微生物学教研室	21	24	3.0	4.0
2	李冬田	天津医科大学医学微生物学教研室	32	46	4.0	5.0
3	李光明	天津医科大学医学微生物学教研室	23	67	4.0	7.0
4	李秋香	天津医科大学医学微生物学教研室	17	24	3.0	4.0
5	尹冰楠	天津医科大学医学微生物学教研室	13	30	3.0	5.0