缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1对缺氧诱导因子1α和p300在体外结合的影响

• 作者: 刘长江 时永全 杜昱蕾 梁洁 樊代明 潘阳林 韩霜
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞低氧 原核细胞 胃肿瘤
• 年，卷（期）: 2005,（33）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2344-2348
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2005.33.010

摘要

目的探讨丝裂原活化的蛋白激酶磷酸酶1 (MKP-1)1α(HIF-1α)和p300在体外结合的影响.方法 采用DNA重组技术构建含HIF-1α反式激活域(TAD)的原核表达载体并进行原核表达;利用谷胱甘肽-琼脂糖珠子纯化原核表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白;利用脂质体将含MKP-1的正义真核表达载体和空载体转入SGC7901细胞;借助Pull-down试验和Western 印迹检测MKP-1或PD98059对HIF-1α与协同激活因子p300在体外结合的影响;Western印迹检测MKP-1对p300表达的影响.结果 (1)成功构建了含HIF-1αTAD的原核表达载体,使含HIF-1αTAD的GST融合蛋白在BL-21大肠杆菌中得到表达.(2)利用谷胱甘肽-琼脂糖珠子纯化得到了含HIF-1αTAD的GST融合蛋白.(3) 缺氧12 h后,GST融合蛋白HIF-1αTAD从PD98059处理细胞裂解液中洗脱的p300量低于从二甲基亚砜(DMSO)处理细胞和SGC7901细胞裂解液中洗脱的p300.(4)分别将MKP-1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC7901细胞;缺氧12h后,GST融合蛋白从MKP-1正义真核表达载体转染细胞(SGC7901-MKP-1)裂解液中洗脱的p300的量低于从空载体转染细胞(SGC7901-空载体)和未转染细胞(SGC7901)裂解液中洗脱的p300.(5)缺氧12 h后,p300的表达量在SGC7901-MKP-1、SGC7901-空载体和SGC79013组细胞中无变化.结论 MKP-1抑制HIF-1α和p300在体外结合.对缺氧诱导因子

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘阳林	第四军医大学西京医院消化病研究所	21	120	6.0	10.0
2	樊代明	第四军医大学西京医院消化病研究所	268	1902	21.0	30.0
3	时永全	第四军医大学西京医院消化病研究所	69	547	12.0	20.0
4	韩霜	第四军医大学西京医院消化病研究所	11	59	5.0	6.0
5	刘长江	济南军区总医院消化科	25	79	5.0	7.0
6	梁洁	第四军医大学西京医院消化病研究所	11	95	3.0	9.0
7	杜昱蕾	第四军医大学西京医院消化病研究所	1	3	1.0	1.0