表达过氧化物酶增殖物激活受体γ1全长基因质粒的构建及其在转染的系膜细胞中功能的鉴定

• 作者: 孙晶 林善锬 郝传明 顾勇 马骥
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转染 质粒 过氧化物酶增殖物激活受体γ1 系膜细胞
• 年，卷（期）: 2005,（33）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2338-2343
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2005.33.009

摘要

目的构建过氧化物酶增殖物激活受体γ1(PPARγ1)全长表达基因质粒,观察PPARγ1过表达对系膜细胞细胞外基质(ECM)的作用.方法 将野生型(WT)小鼠PPARγ1全长cDNA连接入真核细胞表达质粒pIRES2-绿色荧光蛋白中,以脂质体介导的方法将该表达质粒pIRES2 -EGFP-mPPARγ1/WT转染入系膜细胞,采用RT-PCR、Western印迹、PPARγ与PPRE结合活性测定等方法鉴定PPARγ1在系膜细胞中的表达与活性,并且给予高糖(30 mmol/L)刺激,观察PPARγ1过表达对TGF-β1、PAI-1及纤连蛋白等ECM的作用.本研究中同时以一用相同方法构建的表达功能缺陷型(DN)PPARγ 1的质粒pIRES2-EGFP- mPPARγ1/DN作为对照.结果 限制性酶切及DNA测序结果均说明所构建的质粒为PPARγ1全长表达基因质粒.该质粒的表达在转染48 h后达到高峰.PPARγ1过表达能显著减少高糖所致的系膜细胞的转化生长因子(TGF)-β1、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)-1的mRNA和培养细胞上清液中FN的高表达(P<0.05).结论 PPARγ1全长表达基因质粒的构建为进一步研究PPARγ1的效应和机制提供了有利的工具,此研究结果显示 PPARγ1过表达可以抑制高糖引起的细胞外基质的积聚.