关节软骨缺损修复的基因治疗实验人胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染软骨细胞及其在软骨细胞中的表达

• 作者: 刘尚礼 宋卫东 李卫平 李建华 沈慧勇 韩运 黄建荣
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨细胞 软骨,关节 胰岛素样生长因子Ⅰ 基因
• 年，卷（期）: 2005,（38）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 80-83
• 页数: 5页
• 分类号: R681
• 字数: 7573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.38.051

摘要

目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染人软骨细胞的可能性及其在软骨细胞中的表达,并初步判断转基因细胞的生物学功能变化.方法:实验于2002-07/2003-06在中山大学附属第二医院医学研究中心完成.①构建pcDNA3.1-胰岛素样生长因子I/GS质粒,将构建质粒在大肠杆菌DH10B中大量扩增后,抽提纯化质粒,并对质粒进行测序鉴定.②将鉴定的质粒用阳离子脂质体转染人关节软骨细胞,通过逆转录-聚合酶链反应、Westren-blot等方法检测胰岛素样生长因子Ⅰ基因在人关节软骨细胞中的表达.③分别将同代软骨细胞与转基因细胞的培养液、软骨细胞与转基因细胞裂解液和二甲基亚甲蓝共孵育后,检测各混合液的吸光度,以此判断同代软骨细胞、转基因细胞、软骨细胞培养液、转基因细胞培养液中的蛋白多糖含量.结果:①质粒鉴定结果:质粒抽提纯化后电泳可见3条DNA条带,符合质粒的电泳图谱;质粒的测序结果和胰岛素样生长因子Ⅰ基因序列完全吻合.②胰岛素样生长因子Ⅰ基因在软骨细胞中的表达:质粒转染软骨细胞后,反转录-聚合酶链反应能见到298 bp的胰岛素样生长因子ⅠmRNA片断的表达;Western-blot可见7.6 ku的胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白表达条带.③转胰岛素样生长因子Ⅰ基因对软骨细胞分泌蛋白多糖的影响:转基因软骨细胞裂解液和同代的软骨细胞裂解液的蛋白多糖含量分别是(5.23±0.62)mg/L和(2.47±0.31)mg/L,两组比较,差异有显著性意义(t=2.88,P＜0.05);转基因软骨细胞培养液和同代非转染软骨细胞培养液中的蛋白多糖含量分别为(9.92±1.04)mg/L和(4.56±0.51)mg/L,两组比较,差异有显著性意义(t=6.47,P＜0.05).结论:胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染人关节软骨细胞后能在软骨细胞中表达,并能促进软骨细胞分泌软骨基质蛋白多糖,具有促DNA合成和维持软骨细胞表型稳定的能力.转胰岛素样生长因子Ⅰ基因软骨细胞的研究为体外软骨组织工程和关节软骨病的基因治疗提供了直接的实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李建华	广州医学院生理教研室	48	388	11.0	16.0
2	刘尚礼	中山大学附属第二医院骨科	207	1649	19.0	31.0
3	沈慧勇	中山大学附属第二医院骨科	99	805	14.0	21.0
4	黄建荣	中山大学附属第二医院骨科	87	757	16.0	23.0
5	李卫平	中山大学附属第二医院骨科	66	334	10.0	15.0
6	宋卫东	中山大学附属第二医院骨科	68	248	8.0	13.0
7	韩运	中山大学附属第二医院骨科	3	11	2.0	3.0