两种不同消化方法对表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体表达的干预

• 作者: 刘坡 利天增 徐盈斌 祁少海 舒斌 谢举临 黄冰
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮/细胞学 干细胞 结合素类/生物合成 受体,转铁蛋白 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2005,（46）
• 所属期刊栏目: 实验技术方法研究
• 页码范围: 83-85
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6909字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.46.048

摘要

目的:采用单纯胰酶和中性蛋白酶联合胰酶两种不同的消化方式,观察表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体CD71表达的变化,为荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞选择合适的消化方法.方法:选取中山大学附属第一医院外科门诊包皮环切手术患者的皮肤标本10份,患者均知情同意,年龄14～22岁.每份标本均分为2份,分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,分为胰酶组、中性蛋白酶联合胰酶组,10份/组.胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的胰酶中,4℃消化过夜.次日撕除表皮角质层,以弯镊轻刮皮肤上皮面,获得表皮基底层细胞;中性蛋白酶联合胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的中性蛋白酶中,4℃消化过夜.次日轻撕下皮肤表皮层,将其剪成1 mm×1 mm大小的碎块,以质量浓度为2.5g/L的胰酶消化5 min,获得表皮基底层细胞.分别取两组细胞悬液300 μL,加入碘化丙啶标记死亡细胞,流式细胞仪检测死亡细胞百分率,计算细胞活力.以荧光标记的α6整合素和CD71抗体标记细胞表面抗原,通过流式细胞术检测抗原表达.剩余细胞以表皮细胞培养液重悬,移入预先铺有100 mg/LⅣ型胶原的培养瓶中,接种密度为5×104/cm2,3 d换液1次,观察两组细胞的生长情况.结果:实验纳入包皮环切手术患者的皮肤标本10份,每份标本分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,全部进入结果分析.①不同酶消化后两组细胞活力的比较:中性蛋白酶联合胰酶组细胞活力明显高于胰酶组[(86±1.81)%,(82±1.48)%,P＜0.01].②不同酶消化后两组细胞抗原的表达:胰酶组α6briCD71dim细胞占(8.00±1.69)%,α6briCD71bri细胞占(36.00±18.03)%,α6dim细胞占(40.00±10.08)%;中性蛋白酶联合胰酶组3种细胞所占比例依次为(30.00±8.59),(8.00±1.63),(38.00±8.72)%,两组各抗原的表达基本相似(P＞0.05).③不同酶消化后两组细胞形态学观察结果:胰酶组细胞贴壁及伸展较中性蛋白酶联合胰酶组稍迟0.5～1.0 h,此后培养过程中生长增殖情况无明显差异,一般7 d左右接近融合,传代.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,可见夹杂有成纤维细胞.中性蛋白酶联合胰酶组细胞30 min内基本贴壁,并有少量细胞伸展,60 min后大部分细胞伸出短小伪足,胞质展开,折光率减低.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,未见夹杂有成纤维细胞.结论:从对表面抗原表达影响的角度来看,单纯胰酶消化与中性蛋白酶联合胰酶消化后α6briCD71 dim,α6briCD71bri,α6dim这3种表皮细胞的检出率基本相似,两种消化方法可根据习惯选用.但中性蛋白酶联合胰酶消化对细胞活力影响小,消化时机容易掌握,对细胞损伤相对小,适用于荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	舒斌	中山大学附属第一医院烧伤科	28	127	7.0	9.0
2	祁少海	中山大学附属第一医院烧伤科	55	348	10.0	16.0
3	谢举临	中山大学附属第一医院烧伤科	42	306	9.0	15.0
4	徐盈斌	中山大学附属第一医院烧伤科	57	422	10.0	18.0
5	黄冰	中山大学中山眼科中心眼科视觉科学重点实验室	43	246	9.0	13.0
6	利天增	中山大学附属第一医院烧伤科	33	291	9.0	16.0
7	刘坡	中山大学附属第一医院烧伤科	3	16	2.0	3.0