maltosyl-agarose亲和层析法提取人肺灌洗液中肺表面活性物质结合蛋白 A及其鉴定

• 作者: 封志纯 李秋平 杜江 樊慧珍
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺表面活性物质 载体蛋白质类
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 884-886
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2005.09.002

摘要

目的:提取及纯化人肺灌洗液中肺表面活性物质结合蛋白 A(SP-A).方法:由支气管肺泡灌洗液经 10 000 g离心 40 min获得的沉淀中提取 SP-A.沉淀溶解于 6M的尿素, SP-A蛋白重新复性后上清过 maltosyl-agarose柱进行亲和层析,用梯度 EDTA洗脱 SP-A,并过 surpose 6柱纯化.聚丙烯酰胺电泳和 Western blotting鉴定.结果:经亲和层析法可以从人肺灌洗液中提取出高纯度的 SP-A,聚丙烯酰胺电泳在 36 ku和 70 ku处可见清晰条带,在分子量 118 ku以上亦可看到 3条清晰条带,经 Western blotting鉴定均为特异性 SP-A蛋白.结论:采用 maltosyl-agarose亲和层析法可以从肺灌洗液中获得高纯度的 SP-A.为进一步研究 SP-A的功能和制备 SP-A单克隆抗体提供了充足的 SP-A来源.