干细胞因子动员骨髓干细胞归巢梗死心肌的特性变化

• 作者: 吴贤仁 张钰 李玉光 杨敏 闫纯英 陈广玲 陈畅 黄林喜
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌梗塞 干细胞因子 骨髓细胞 归巢
• 年，卷（期）: 2005,（26）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 67-70
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2
• 字数: 8158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.26.032

摘要

目的:观察应用干细胞因子动员后骨髓干细胞归巢于梗死心肌组织及其进一步分化的能力,以及激素干预后其归巢特性的变化.方法:实验于2003-09/2004-09在汕头大学医学院第一附属医院心血管病研究室完成.选用10～12周龄的雄性Wistar大鼠60只.随机分为3组,每组20只,分别为心肌梗死+动员组、心肌梗死+激素+动员组以及心肌梗死组.①结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型.②动物分组干预:心肌梗死+激素+动员组大鼠于造模后即刻按30 mg/kg剂量经尾静脉注射甲基强的松龙注射液.心肌梗死+动员组和心肌梗死+激素+动员组大鼠在造模3 h后按30μg/(kg·d)剂量皮下注射重组人干细胞因子,共5 d,心肌梗死组大鼠则于造模后,不作任何处理.③于造模前和造模后24 h和4周应用流式细胞仪计数各组大鼠制模前后外周血中CD34阳性细胞(骨髓干细胞表面标记)表达百分率.④随后杀死大鼠,取出心脏,免疫组织化学染色法鉴定检测造模后24 h各组大鼠心肌梗死区、边缘区组织中是否存在CD34阳性细胞;检测造模后24 h、4周各组大鼠梗死心肌组织中基质细胞衍生因子1的表达.⑤采用BI-2000医学图像分析系统分析造模后24 h和4周各组大鼠梗死心肌组织中基质细胞衍生因子1的表达量.对图像进行平均灰度值测定,以此代表该组织切片内基质细胞衍生因子1的相对含量.灰度值的高低与表达量成反比关系.⑥苏木精-伊红染色观察造模后24 h和4周各组大鼠心肌细胞形态特征及细胞排列方向等组织学变化.结果:大鼠60只均进入结果分析.①造模后24 h和4周大鼠外周血单个核细胞中CD34表达百分率:心肌梗死+动员组和心肌梗死+激素+动员组明显高于造模前[(0.919±0.187)%,(0.834±0.110)%;(0.886±0.104)%,(0.794±0.296)%;(0.043±0.023)%,(0.041±0.028)%,t=2.679,2.354,2.413,2.208,P＜0.05].②造模后24 h大鼠归巢于梗死灶内心肌组织中CD34阳性细胞数量:心肌梗死+动员组明显多于心肌梗死+激素+动员组和心肌梗死组(t=2.607,2.816,P＜0.05).(3)造模后24 h大鼠梗死灶内基质细胞衍生因子1表达量:心肌梗死+动员组明显大于心肌梗死+激素+动员组和心肌梗死组(t=2.825,2.341,P＜0.05),心肌梗死+激素+动员组最少.④心肌组织学变化:心肌梗死+动员组大鼠心肌梗死程度轻,可见CD34阳性的幼稚心肌细胞样细胞,缺血心肌基本结构得到保护.在动员干细胞24 h后,心肌梗死+动员组大鼠心肌梗死灶中有大量CD34阳性单个核细胞浸润,为骨髓源干细胞(包括造血干细胞、内皮干细胞等),同时还发现有与浸润的单个核细胞的胞核相似,但较大而圆,位于细胞中央,胞浆少而深染的细胞,其免疫组化检测CD34也呈阳性,考虑可能是浸润的骨髓干细胞正向心肌细胞分化早期,故形态幼稚.心肌梗死+激素+动员组大鼠由于激素治疗的影响,归巢梗死灶的干细胞数量少,因此骨髓动员4周后,心肌梗死+激素+动员组大鼠缺血心肌细胞变性,融合成片,心肌组织排列有序的基本结构遭到破坏而瘢痕化;而心肌梗死+动员组大鼠由于归巢的干细胞数量多,动员治疗4周时的病理切片可见核大、胞浆丰富、深染的心肌细胞,其缺血心肌的基本结构得到保护,组织结构排列基本处于有序状态.结论:①应用干细胞因子动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞后,有较多干细胞向梗死灶迁移存活,在心肌微环境作用下向心肌细胞、血管内皮细胞等方向分化,保护缺血心肌基本结构.②骨髓干细胞动员后,心肌梗死灶内基质细胞衍生因子1表达量上调,可能是吸引骨髓干细胞归巢于梗死灶的原因之一.③骨髓干细胞归巢于梗死灶内不依赖于冠状动脉血流的再通.④激素可阻断炎症反应过程,但同时也抑制了骨髓干细胞向梗死灶归巢.