难愈性创面修复局部人血管内皮生长因子165真核表达载体的构建与评价

• 作者: 冉新泽 刘志君 徐辉 许川山
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,血管内皮生长因子 创伤和损伤 血管生成因子
• 年，卷（期）: 2005,（22）
• 所属期刊栏目: 技术方法研究
• 页码范围: 119-121
• 页数: 3页
• 分类号: R644
• 字数: 4090字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.22.066

摘要

目的:克隆人血管内皮生长因子165 cDNA并构建其真核表达载体,为放创复合伤的难愈性创面的促愈修复提供实验基础.方法:实验于2001-09/2003-05在第三军医大学创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.从白血病HL-60细胞提取总RNA,经过反转录-聚合酶链反应扩增编码人血管内皮生长因子165的cDNA序列,将其克隆至pMD18-T载体后进行测序鉴定,然后将该序列插入双顺反子的真核表达载体pIRES2-EGFP的多克隆位点中.观察以下指标①反转录-聚合酶链反应扩增人血管内皮生长因子165 cDNA.②阳性重组质粒pMD18-T-hVEGF165的筛选.③DNA测序鉴定.④阳性重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF165的筛选.结果:反转录-聚合酶链反应扩增得到约600 bp的目的DNA片段,酶切pMD18-T-hVEGF165得一与目的片段大小一致的条带,且测序分析其与GeneBank中报道的编码人血管内皮生长因子165 cDNA序列完全一致.pIRES2-EGFP-hVEGF165的酶切电泳显示目的条带成功插入真核表达载体pIRES2-EGFP中.结论:成功构建了含有人血管内皮生长因子165 cDNA的真核表达载体,如果通过转基因技术可提高血管内皮生长因子165在放创复合伤难愈性创面的局部的表达,有望为修复难愈创面开辟一条新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许川山	重庆医科大学超声影像学研究所	70	596	13.0	21.0
2	刘志君	解放军第三军医大学野战外科研究所全军战创伤中心	3	39	2.0	3.0