人瘦素分离纯化的实验研究

• 作者: Liu Xian-jun 刘方欣 漆洪波
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白质类/分析 分离和纯化 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 162-164
• 页数: 3页
• 分类号: R59
• 字数: 964字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.07.062

摘要

背景:瘦素是脂肪组织产生的一种激素,具有广泛的生理作用,也是近年能量代谢研究的热点之一,所用瘦素主要是大肠杆菌的表达产物,后者以不溶解的包含体形式存在,需要通过烦琐的复性过程才能获得具有生物学活性的人瘦素.目的:为获得天然溶解形式的人瘦素,探索其非亲和层析纯化条件,为进一步可能的产业化提供依据.设计:实验观察.单位:一所医学院的生化教研室分子生物学实验室.材料:选择强阴离子交换剂(Sepharose Q)和疏水介质(Phenyl Sepharose 6)在条件下进行层析的方法,以尽可能除去样品中的杂质.方法:将培养获得的上清液在pH 7.5的条件下首先经过Q柱柱层析纯化,收集目的蛋白;随后在高盐[mol/L(NH4)2SO4]状态下通过疏水层析进一步纯化.主要观察指标:经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结果:纯化产物在SDS-PAGE上呈现单一条带.经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结论:通过强阳离子交换层析和疏水层析的合并应用,可将毕赤酵母表达系统表达的人瘦素进行有效纯化,纯度可达镍柱亲和层析的纯化结果,为进一步可能的产业化生产人瘦素提供了可靠依据和方法,为围绕瘦素的相关领域研究奠定了实验学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	漆洪波	重庆医科大学核医学教研室	395	2590	23.0	41.0
2	刘方欣	重庆医科大学第一医院妇产科	22	53	5.0	6.0
3	Liu Xian-jun	重庆医科大学核医学教研室	1	1	1.0	1.0