去势与非去势不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达特点

• 作者: 张伟 穆臣会 陶树清
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢切除术 成骨细胞 受体,雌激素 印迹法,蛋白质
• 年，卷（期）: 2005,（27）
• 所属期刊栏目: 骨质疏松症康复
• 页码范围: 153-155
• 页数: 3页
• 分类号: R681.4
• 字数: 5576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.27.090

摘要

目的:观察去势与非去势雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达水平,并比较其变化特点. 方法:实验于2003-02/06在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成.分别取新生,2,4,6,8,10,12个月龄的雌性Wistar大鼠各14 只,按月龄分为6组,2,4,6,8,10,12个月龄组,各月龄组再随机分对照组,正常饲养不造模;去势组行卵巢切除造模,每组各7只.两个月后处死.①成骨细胞的生物学特征检测:取新生雌性Wistar大鼠14只用于大鼠成骨细胞体外培养.采用二次酶消化法、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞.采用倒置显微镜观察成骨细胞形态及超微结构.大鼠成骨细胞检验学特征碱性磷酸酶检测采用改良钙钴法,阳性反应为胞质中出现灰黑至深黑颗粒状或片状沉淀.成骨细胞培养上清液碱性磷酸酶及骨钙素检测,采用磷酸对硝基苯酯二钠盐比色法进行碱性磷酸酶检测,测得A值,换算成国际单位.采用放射免疫试剂盒进行骨钙素检测,计数器测定沉淀物cpm值,根据标准曲线得到样品中骨钙素含量.②成骨细胞内雌激素受体检测:应用半定量蛋白印迹酶促底物染色法以及发光法.测得A值,以A值越高,说明雌激素受体β表达越多. 结果:纳入84只大鼠分为6组,均进入结果分析.①成骨细胞形态学观察:随着培养时间的延长,细胞伸出较多突起,细胞融合成片,培养12～18 d呈多层生长.②大鼠成骨细胞碱性磷酸酶染色结果:镜下见90%的细胞呈碱性磷酸酶染色阳性.③成骨细胞培养上清液碱性磷酸酶及骨钙素含量:成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素明显高于成纤维细胞(P＜0.01).④去势与非去势大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达结果:应用酶促低物染色法测定,非去势组雌激素受体β表达在2个月龄组呈低度表达(90.81±2.20),4,6个月组雌激素受体β开始呈现上升趋势(121.10±5.78,143.20±4.41)至8,10个月组雌激素受体β达到高峰(186.10±6.60,190.90±6.10),10月组以后表达呈现下降趋势;去势组2,4,6,8,10,12个月组雌激素受体β都呈低度表达(87.80±2.51,89.50±2.72,89.81±2.43,90.59±2.34,92.52±2.62,90.39±2.53),除2个月龄组以外,其他各月龄组非去势组均显著高于去势组(P＜0.05,0.01). 结论:①本实验采用酶消化法培养的细胞符合成骨细胞的生物学特征,具备成骨细胞功能.②去势大鼠在观察的不同时限点均出现成骨细胞雌激素受体β表达较同月龄非去势大鼠显著减少,说明去势影响成骨细胞内雌激素受体β的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶树清	哈尔滨医科大学第二临床医学院骨外二科	47	351	9.0	17.0
2	张伟	哈尔滨医科大学第二临床医学院骨外二科	26	63	5.0	6.0
3	穆臣会	哈尔滨医科大学第二临床医学院骨外二科	2	5	1.0	2.0