大鼠胰腺间质细胞体外培养过程及其形态学特征

• 作者: 刘卫鹏 封志纯 张传仓 朱为国 杜江
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 连续传代 胰腺 间质细胞
• 年，卷（期）: 2005,（26）
• 所属期刊栏目: 干细胞研究
• 页码范围: 79-81
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 5682字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.26.034

摘要

目的:对胰腺间质细胞进行原代及传代培养,观察其形态学的变化.以探索一种简单稳定的获取及培养胰腺间质细胞的方法.方法:用机械剪切加胰蛋白酶消化的方法制备SD大鼠胰腺单细胞悬液,取新生SD大鼠1只麻醉断髓处死,体积分数0.75的乙醇浸泡消毒,无菌条件下取出胰腺组织,去除红细胞,剪切,加入胰蛋白酶消化,消化终止后细胞筛过滤,收集滤过的细胞悬液离心,弃上清液,重复1次.收集获得的单个胰腺间质细胞.接种于含体积分数0.1的胎牛血清、0.05g/L的亚胺培南的DMEM/F-12(1:1)培养基,培养48 h后换液,弃上清及悬浮细胞,继续培养48h后,换用含1×10-5mol/L阿糖胞苷的完全培养基培养24 h,再换正常培养基继续培养,在培养细胞达到80%～90%的细胞汇合时,按1:3进行传代培养.测定细胞生长曲线及贴壁率,原代细胞及传代细胞用双硫腙染色,鉴定有无胰腺β细胞.结果:①原代细胞及传代细胞形态学观察:原代培养换液前,显微镜下可见细胞大小不等,悬浮,有较多细胞碎片.48 h首次全量换液后,悬浮细胞减少,经3次换液可基本去除.加用阿糖胞苷培养24 h,大量细胞相继死亡.至第10-14天,培养细胞明显增加,基本铺满瓶底,以星形、梭形为主,细胞呈放射状或漩涡状生长,部分区域呈灶状.传至第5代细胞出现老化.②细胞生长曲线:细胞从传代后第2天,数量即开始增加,第4天增加幅度最大,至第6天细胞数量最大,以后数量略有下降.传代培养对数增殖期为2-4 d,对数增殖期结束后,第6天细胞生长缓慢,进入平台期.③细胞的贴壁率:传代细胞培养2 h已有部分细胞贴壁;培养4 h贴壁细胞接近50%;培养10 h贴壁达79%;培养12 h细胞全部贴壁,而且部分细胞开始分裂增殖,细胞形态与原代细胞基本相似.④胰腺β细胞的化学鉴定:对胰腺组织分离所得单个细胞、原代培养细胞及传代培养细胞分别用双硫腙染色.培养前细胞染色,可见少量腥红色细胞,随着培养时间延长腥红色细胞逐渐减少,在原代培养10～14 d,腥红色细胞消失,传代培养细胞染色未见腥红色细胞.结论:细胞培养12 h全部贴壁,传代培养对数增殖期为2-4 d,第6天细胞进入平台期.原代培养胰腺间质细胞形态多样,主要呈梭形,少数呈三角形或星形,贴壁爬行生长,第1周增殖较慢,随后增殖加速,细胞团块多见,偶可见大的圆形细胞生长,核大,胞浆内颗粒多.传代培养,细胞能迅速贴壁生长,细胞形态逐渐均一,主要为梭形、三角形细胞,呈集落样生长,双硫腙染色阴性;但细胞培养至第5代,胞浆颗粒增多,细胞增殖减慢,大部分细胞逐渐老化死亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜江	南方医科大学珠江医院儿科	65	329	10.0	12.0
2	封志纯	南方医科大学珠江医院儿科	102	798	14.0	23.0
3	张传仓	南方医科大学珠江医院儿科	8	60	4.0	7.0
4	朱为国	南方医科大学珠江医院儿科	5	19	1.0	4.0
5	刘卫鹏	南方医科大学珠江医院儿科	4	29	2.0	4.0