摘要:
目的:观察同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞的损伤及抗氧化药物丙丁酚的拮抗作用,并观察这种拮抗作用是否有浓度依赖性.方法:实验于2004-04/10在广西壮族自治区人民医院实验中心完成.取Wistar大鼠2只,用酶溶液消化大鼠脑皮质组织制成细胞悬液再进行培养传代.①经过鉴定的大鼠脑微血管内皮细胞分为损伤组和正常对照组,正常对照组加入无血清1640培养液;损伤组分别加入用无血清的培养液配制的浓度为0.1,0.5,1.0,1.5,2.0mmol/L的同型半胱氨酸,两个组孵育2,4,6,8,10 h后计算血管内皮细胞损伤的指标乳酸脱氢酶释放率.②另将细胞分为3组,正常对照组换用无血清1640培养液孵育8 h;损伤组加入1.0 mmol/L同型半胱氨酸孵育8 h;干预组分别加入终浓度为10,20,30,40,50 μmol/L的丙丁酚各孵育30 min后再加入1.0mmol/L同型半胱氨酸孵育8 h,然后计算乳酸脱氢酶释放率.③将细胞分为3组:正常对照组RPMI-1640培养基常规培养;损伤组:RPMI-1640培养基+同型半胱氨酸1.0mmol/L进行培养;干预组:RPMI-1640培养基+丙丁酚50 μmol/L 30 min后再加入同型半胱氨酸1.0 mmol/L进行培养.一共观察7 d,并画出细胞生长曲线.结果:①同型半胱氨酸在浓度1.0 mmol/L孵育时间8 h时乳酸脱氢酶释放率最高,显著高于对照组[(49.06±1.07)%,(19.6±2.04)%,P<0.01].②丙丁酚在10,20,30,40,50 μmol/L时乳酸脱氢酶释放率为(45.57±1.31)%,(41.17±1.25)%,(37.9±0.69)%,(32.57±2.47)%,(26.26±2.34)%,与损伤组相比差异显著[(49.03±1.12)%,P<0.05],且丙丁酚浓度越高,乳酸脱氢酶释放率越低.③细胞存活数:损伤组低于干预组和对照组(P<0.01),后两组间无差异(P>0.05).结论:同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞有毒性损伤作用,丙丁酚10~50μmol/L呈剂量依赖性拮抗作用同型半胱氨酸所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤.