摘要:
背景:大量的动物实验和临床应用已经证实,人发角蛋白(human hair keratin,HHK)人工腱能诱导机体形成自生腱,自生腱形成的过程实质上主要是胶原Ⅰ型的合成、分泌和组装的过程.目的:探讨胶原Ⅰ型mRNA在人发角蛋白人工腱诱导自生腱组织形成过程中的表达.设计:以实验动物为观察对象,完全随机对照实验.单位:南方医科大学组织学与胚胎学教研室和生物化学与分子生物学教研室.材料:实验于2003-05/2004-09在解放军第一军医大学实验动物中心完成.实验动物中心提供实验用新西兰大白兔33只,体质量2.0~2.5 kg,雌雄不限.随机分成实验3,6,9,12,16,20周组,阴性对照9,20周组和正常对照组,其中实验3,6周组和正常对照组每组3只,其余每组4只.由生物化学与分子生物学教研室提供的人发角蛋白人工腱为经一系列生物化学处理的人发,按降解速度不同可分为快速(F)、中速(B)和慢速(Z)3个不同降解组分.人发角蛋白人工腱是由快速,中速和慢速这3种组分按4:3:3的比例混合编制而成.方法:①实验组行双侧跟腱手术,切断跟腱长1 0~2.0 cm,两断端与人发角蛋白人工腱缝合,缝合腱膜,皮肤一期缝合.②阴性对照组为离断兔肌腱1.0~2.0 cm,断裂肌腱不进行连接,而缝合腱膜和皮肤.③正常对照组为正常兔肌腱.实验组分别于第3,6,9,12,16,20周取材,阴性对照组分别于第9,20周取材.通过反转录聚合酶链反应技术测量各时期胶原Ⅰ型mRNA表达.主要观察指标:正常肌腱与人发角蛋白人工腱各个时期诱导形成的自生腱中胶原Ⅰ型mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GADPH)mRNA表达的比值.结果:33只大鼠全部进入结果分析.①正常肌腱组织中Ⅰ型胶原mR-NA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA表达的比值为0.96±0.02.②阴性对照组9,20周组取材发现,两断端肌腱未连接,并且向两侧回缩.③实验组人发角蛋白人工腱植入后诱导形成的自生腱中Ⅰ型胶原mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA表达在第3周的已经出现,第3~6周为急骤上升,第6周到达高峰,第9~20周表达量呈稳定状态.实验组第6周表达量明显高于正常对照组(F=6.254,P<0.05),实验组其余各周表达量也明显高于正常对照组(F=1.258~1.987,P>0.05).结论:人发角蛋白人工腱植入后,自生腱的形成主要是腱细胞增殖活化,合成并分泌胶原Ⅰ型蛋白,完成肌腱的修复.