重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在小鼠成肌细胞中的表达

• 作者: 党耕町 杨民 蔡善保 郭均 马庆军
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨折愈合 骨形态发生蛋白质类 腺病毒,人 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 56-58
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.06.023

摘要

目的:构建重组人骨形态发生蛋白7的腺病毒载体(AdBMP7),并观察其在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况.方法:实验于2004-05/10在北京大学医学部完成.RT-PCR方法从HKE293细胞中克隆出hBMP7 cDNA并亚克隆入穿梭质粒pAdtrackcmv中,构建pAdtrackcmv-hBMP7质粒.该质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组后挑选阳性重组体pAd-hBMP7质粒.线性化pAd-hBMP7质粒转染293A细胞后检测病毒噬斑形成情况,并于转染后9 d收获病毒,大量扩增并制备高纯度、高滴度的AdBMP7.将AdBMP7按MOI=100来感染C2C12细胞,48 h后分别应用RT-PCR和免疫组化方法来检测hBMP7在mRNA和蛋白水平的表达.结果:成功克隆出hBMP7 cDNA,酶切鉴定pAdtrackcmv-hBMP7和pAd-hBMP7质粒正确重组,获得纯化后滴度达到5×1012vp/mL的AdBMP7.AdBMP7能有效感染C2C12细胞并表达hBMP7蛋白.结论:应用AdEasy-1腺病毒载体系统可在短期内制备高滴度的携带GFP和hBMP7的重组腺病毒AdBMP7,并在为进一步研究BMP7基因治疗促进骨愈合打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	党耕町	北京大学第三医院骨科	187	3697	31.0	51.0
2	马庆军	北京大学第三医院骨科	75	1088	15.0	29.0
3	蔡善保	北京大学第三医院骨科	4	44	2.0	4.0
4	杨民	北京大学第三医院骨科	10	152	5.0	10.0
5	郭均	北京大学第三医院骨科	2	4	2.0	2.0