绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

• 作者: 卢亦路 夏庆杰 张发强 曹桂群 袁琼兰 闫乃红 陈清英
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经系统 干细胞 脑源性神经营养因子 病毒
• 年，卷（期）: 2005,（34）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养技术研究
• 页码范围: 26-28
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 4523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.34.011

摘要

目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值.方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行.以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中,与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体.线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达.结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653 bp个核苷酸,同源性比较该序列正确.②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL.③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经于细胞扩增出653 bp的带.结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫乃红	四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室	21	139	7.0	11.0
2	张发强	四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室	7	42	5.0	6.0
3	陈清英	四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室	11	62	5.0	7.0
4	袁琼兰	泸州医学院人体解剖学教研室	31	212	9.0	13.0
5	曹桂群	四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室	6	22	3.0	4.0
6	卢亦路	四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室	4	6	1.0	2.0