摘要:
背景:脑海马作为边缘系统的重要组成部分,参与情绪、感觉活动、学习记忆功能,麻醉状态下对其产生影响.目的:利用异丙酚靶控输注精确控制麻醉深度,观察不同麻醉深度下兔脑海马不同区域c-fos基因的表达水平,了解异丙酚发挥中枢抑制的作用位点.设计:随机对照观察.单位:深圳市第二人民医院麻醉科,华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科.材料:实验于2000-05/2001-06在华中科技大学同济医学院神经生物学实验室完成.选取日本大耳兔30只,随机分为空白对照组、浅麻醉组、深麻醉组,10只/组.方法:全部动物行颈外静脉、股动脉穿刺置管.以相应靶控血药浓度进行靶浓度控制输注,严格控制各组麻醉深度.浅麻醉组给予异丙酚靶控血药浓度为(9.28±0.12)mg/L,深麻醉组给予异丙酚靶控血药浓度为(11.63±0.29)mg/L,达到所需麻醉状态30min后两组动物断头处死,空白对照组行耳缘静脉注射空气造成空气栓塞后处死.各组常规进行连续冠状切片,片厚7 μm,每隔100 μm取1张,进行原位杂交检测脑海马CA1区、CA3区和齿状回区的c-fos mRNA表达水平.每只兔随机取5张切片,光镜下分别选取各区15~20个视野进行拍摄,计算平均吸光度与平均灰度值.灰度分为256个等级,阳性率越高,灰度值越低.主要观察指标:①不同麻醉深度下兔脑海马CA1区及齿状回区原位杂交检测结果.②不同麻醉深度下兔脑海马CA1区、CA3区和齿状回区的平均灰度值.结果:30只兔全部进入结果分析.①不同麻醉深度下兔脑海马CA1区原位杂交检测结果:空白对照组可见深浅不一、疏密不等的c-fos阳性细胞,染色呈棕色,分布稀疏;浅麻醉组可见中等着色的c-fos 阳性神经元,分布密集;深麻醉组锥体细胞胞浆染色明显加深,分布也更密集.②不同麻醉深度下兔脑海马齿状回区原位杂交检测结果:浅麻醉组阳性细胞染色呈深棕褐色,染色强烈,细胞核无色透明,呈空泡状;深麻醉组出现大量密集的c-fos 阳性表达.③不同麻醉深度下兔脑海马各区的平均灰度值:与空白对照组CA1区及齿状回区比较,浅麻醉组和深麻醉组均明显降低[(168±5),(80±7),(59±5)%,P均<0.05;(163±8),(103±15),(67±6)%,P<0.05,P<0.01],并且深麻醉组均比浅麻醉组下降显著(P<0.01);各组CA3区基本相似.结论:①异丙酚麻醉随深度的增加,其兔脑海马c-fos基因表达升高.②麻醉后兔脑海马CA1区及齿状回区的平均灰度值明显下降,深麻醉时更为显著,但CA3区无明显变化.提示异丙酚的中枢抑制作用部位存在区域性差异,由此推断脑海马CA3区可能不是异丙酚中枢作用的位点.