Tet-off系统调控人IFNγ基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达

• 作者: 吕跃 徐海鹏 李晓青 谭银多 陈晓勤
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: pTre-IFNγ 构建 小鼠骨髓基质细胞 tet-off 调控
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1573-1576
• 页数: 4页
• 分类号: R733.72
• 字数: 4539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2006.12.024

摘要

背景与目的:Tet-off系统是一个高效、低毒、具有严密开关功能的基因调控系统,本研究构建质粒pTre-IFNγ,初步探讨Tet-off系统调控人干扰素γ(interferon-gamma,IFNγ)基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达.方法:SacⅡ、Xba Ⅰ双酶切载体pTre及目的基因,T4连接酶连接,重组体经双酶切、测序鉴定:脂质体介导pTet-off及pTre-IFNγ共转染小鼠骨髓基质细胞;RT-PCR法检测IFNγmRNA,ELISA法检测分泌到培养液中的IFNγ蛋白,分析共转染后IFNγ的分泌规律、共转染后48 h中不同浓度盐酸四环素对IFNγ蛋白分泌的影响及在共转染后第48 h加入盐酸四环素在不同时间阶段对IFNγ蛋白分泌的影响.结果:双酶切及测序证实质粒pTre-IFNγ构建成功;共转染后48 h RT-PCR检测到IFNγ mRNA表达;ELISA法示IFNγ蛋白分泌持续6天,第3天的分泌高峰为每1×106个细胞(720.09±241.51)Pg;共转染后48 h中蛋白分泌量随四环素浓度增加逐渐减少,10～100 ng/ml四环素存在时蛋白分泌接近零;第48 h时添加盐酸四环素后8 h即能明显抑制IFNγ蛋白表达,延长作用时间,抑制效应加重.结论:Tet-off系统能迅速而高效地下调人IFNγ基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓勤		15	84	5.0	8.0
3	徐海鹏		4	43	3.0	4.0
5	吕跃		8	63	5.0	7.0
7	李晓青		2	7	2.0	2.0
8	谭银多		4	17	3.0	4.0