抑制聚ADP核糖聚合酶1活性的短发夹RNA载体构建

• 作者: 何云 庄志雄 杨建平 沙焱 涂晓志 胡大林 胡恭华
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 医学
• 关键词: RNAi shRNA pEGFP-C1
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-12
• 页数: 3页
• 分类号: R994.6|Q783.2
• 字数: 2698字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8020.2006.01.004

摘要

目的构建抑制人聚ADP核糖聚合酶1(hPARP1)活性的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体.方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的、靶向hPARP1基因的寡核苷酸,各69对碱基,退火,然后利用BamHⅡ及EcoRⅠ与pSIREN-RetroQ载体连接.用EcoRⅠ及BglⅡ切取其中U6启动子及下游的shRNA部分,与pEGFP-C1载体重组构建pEGFP-C1-shRNA载体.结果重组构建的pEGFP-C1P1、pEGFP-C1P2、pEGFP-C1N载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明330个碱基成功插入到预计位点.结论载体的成功构建,为进一步研究聚ADP-核糖聚合酶在DNA修复过程中的功能打下基础.