重组人干扰素大肠杆菌高效表达系统的建立

• 作者: 刘新宇 左爱军 张镜宇 梁东春 郭刚
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 干扰素α-2b 大肠杆菌 基因表达 原核表达系统 遗传密码
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-32
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2006.01.011

摘要

目的:构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核表达系统,以获得rhIFN-α2b在大肠杆菌中的高效表达.方法:依据大肠杆菌遗传密码子频率表,在不改变氨基酸组成的情况下,人工半合成适于在大肠杆菌中表达的rhIFN-α2b编码序列;经PCR扩增后,克隆人表达型质粒载体pDH;筛选阳性菌落,温度诱导表达,表达产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western Blot)鉴定,并以人羊膜细胞-水泡性口炎病毒(WISH-VSV)系统鉴定rhIFN-α2b抗病毒活性.结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定可见与预期大小符合的512 bp的DNA条带;重组质粒pDH/IFN-α2b经序列分析,证实含有与预期相符且读码框架正确的hIFN-2b编码序列;SDS-PAGE可见与IFN-α2b分子质量大小一致的蛋白质条带,Western Blot鉴定此条带为rhIFN-2b,其比活性达(1.8～2)×108U/mg.结论:rhIFN-α2b在大肠杆菌中的高效表达系统构建成功,且能高水平地表达出具有生物活性的rhIFN-α2b.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘新宇	天津医科大学生化教研室	22	103	5.0	9.0
2	梁东春		14	64	4.0	7.0
3	郭刚		11	64	4.0	7.0
4	左爱军		10	46	4.0	6.0
5	张镜宇		9	62	4.0	7.0