表达载体pCAGGS显著增强禽流感DNA疫苗的免疫保护效果

• 作者: 于康震 姜永萍 张洪波 李呈军 步志高 王秀荣 赵有淑 陈化兰
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感 H5亚型 鸡β-actin启动子 DNA疫苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 825-830
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 3837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.04.027

摘要

[目的]将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入鸡β-actin启动子高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果.[方法]将pCAGGHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白,随之将pCAGGHA5及pCIHA5分别以100 μg和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.[结果]间接免疫荧光法和Western-blot分析表明2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI;免疫SPF鸡后,100μg pCAGGHA5可形成5/5的免疫保护,100μg pCIHA5可形成2/4的免疫保护,10μg pCAGGHA5可形成对免疫鸡5/5的免疫保护,而10μg pCIHA5 则基本不能形成免疫保护,pCAGGHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5.[结论]鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.