四环素调控促红细胞生成素基因转导骨骼肌细胞治疗肾性贫血的研究

• 作者: 徐卓佳 戴勇 李体远
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 贫血 肾功能衰竭,慢性 红细胞生成素,重组 四环素调控系统 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2331-2334
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 字数: 4639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2006.20.001

摘要

目的:克隆、构建、鉴定重组人促红细胞生成素(rhEPO)基因四环素调控真核表达载体;探讨四环素系统对rhEPO基因表达的调控.方法:以含rhEPO全长cDNA的CHO细胞为模板,通过RT-PCR方法扩增出rhEPO基因,将其克隆到真核表达载体pTRE2hyg的多克隆位点,构建成pTRE2hyyg-EPO,进行酶切及测序鉴定.将pTRE2hyg-EPO及Tet-On质粒转导入SD大鼠骨骼肌细胞,用RT-PCR、Western印迹实验和半固体细胞培养实验检测rhEPO基因在大鼠骨骼肌内的表达和蛋白的活性,并观察四环素系统对EPO表达的调控作用.结果:(1)成功构建了四环素调控真核表达质粒pTRE2hyg-EPO,经测序鉴定与所需EPO基因序列一致.(2)rhEPO基因可以在大鼠骨骼肌原代细胞中表达,并受四环素调控系统的控制.生成的EPO具有生物活性,可明显刺激骨髓红系细胞的生长.结论:在细胞水平四环素系统可控制转导的EPO基因的表达,并且生成有生物活性的EPO,达到基因治疗的要求.