乳腺珠蛋白基因的克隆及重组蛋白的表达和纯化

• 作者: 吴国球 孙宏伟 张臣 芦慧霞 赵成桂
• 来源期刊: 现代医学
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺珠蛋白 乳腺癌 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 71-75
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R737.9
• 字数: 5405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7562.2006.02.001

摘要

目的克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白.方法从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体.利用BamHI+XhoI双酶切方法将目的基因导入表达载体,阳性质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导获得重组蛋白,并用His-SelectTM和Sephadex-G100进行纯化.结果用RT-PCR方法获得279 bp的片段,克隆至T载体后经DNA测序,结果与预期序列一致.表达质粒转化大肠杆菌后经诱导获得27 kD的目的蛋白,与预期分子质量一致.表达产物最终纯化为一条带.结论成功克隆hMaM基因,并获得高纯度重组蛋白,为hMaM的深入研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	芦慧霞	东南大学附属中大医院临床检验中心	58	304	10.0	15.0
2	吴国球	东南大学附属中大医院临床检验中心	46	241	8.0	13.0
3	孙宏伟	东南大学附属中大医院临床检验中心	9	60	4.0	7.0
4	张臣	东南大学附属中大医院临床检验中心	5	19	3.0	4.0
5	赵成桂	东南大学附属中大医院临床检验中心	6	19	3.0	4.0