禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘胜利 吕建强 林庆燕 林苗 林镜中 秦智锋 肖性龙 金显忠 钟安清 陈书琨 黄运生
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型 实时荧光RT-PCR 多重实时检测
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 131-136
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5436字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.02.011

摘要

为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针.将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒 H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法.该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象.同时敏感性高,检测禽流感病毒 H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 000、1 000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型.所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%.用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%.