猪水泡病病毒HK/70株全长cDNA分子克隆感染性的鉴定

• 作者: 冯霞 刘在新 刘湘涛 吴锦艳 孙世琪 尚佑军 常惠芸 田宏 白兴文 谢庆阁 郑海学 郭建宏 郭慧琛 靳野 马军武
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪水泡病病毒 全长cDNA 感染性克隆 体外转录本 反向遗传学
• 年，卷（期）: 2006,（16）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 1900-1905
• 页数: 6页
• 分类号: Q81
• 字数: 5048字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2006.16.008

摘要

为了鉴定猪水泡病病毒(SVDV) HK/70株的全长cDNA分子的感染性,以所构建的SVDV HK/70株的全长cDNA分子为模板,应用T7 RNA聚合酶系统在体外进行转录,将获得的RNA用脂质体转染法导入IBRS-2细胞,传代培养,观察到典型的SVDV致细胞病变效应.反向血凝鉴定、间接免疫荧光、RT-PCR及序列测定结果表明,从猪水泡病病毒全长cDNA拯救出了猪水泡病病毒(pSVDV).用电子显微镜观察了pSVDV的形态,测定了pSVDV的TCID50和LD50,并与亲本毒进行了比较,结果显示,pSVDV与亲本毒的毒力差别不显著.结果表明,猪SVDV HK/70的感染性cDNA克隆已经成功构建,为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础.