三重融合PCR法构建感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆

• 作者: 付士红 唐青 杨益良 梁国栋 王力华
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 辛德毕斯病毒 融合PCR 嵌合病毒 cDNA克隆 E1糖蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 107-113
• 页数: 7页
• 分类号: R373.3Q78
• 字数: 5283字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.02.006

摘要

利用三重融合PCR法,即将3个DNA片段放在同一个反应里进行长片段PCR扩增法,融合得到了包含辛德毕斯病毒 XJ-160株结构基因E3、E2、6K、3′UTR和辛德毕斯病毒YN87448株结构基因E1的融合DNA片段E3E26KE13′UTR.通过此融合片段两端引入的Xba I和Xho I酶切位点将其连接到XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆骨架上,成功构建了辛德毕斯病毒株XJ-160与YN87448外膜糖蛋白基因E1相互替换的嵌合病毒cDNA克隆,命名为pBR-XJ160YE1.该克隆线性化后经体外转录,RNA转录体脂质体法转染BHK-21细胞,36h后细胞发生病变.间接免疫荧光检测到病毒蛋白的表达.提取5次传代后细胞上清中病毒RNA,RT-PCR法检测证明病毒来源于嵌合病毒cDNA克隆.此感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆可以作为研究辛德毕斯病毒E1糖蛋白基因相关功能及XJ-160病毒和YN87448病毒存在单方向血清学反应的分子机理的分子生物学工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐青	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	57	736	13.0	26.0
2	梁国栋	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	82	555	13.0	20.0
3	付士红	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	34	168	7.0	11.0
4	王力华	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	13	73	5.0	8.0
5	杨益良	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	6	81	4.0	6.0