增强型绿色荧光蛋白基因在人胚胎视网膜前体细胞中的表达

• 作者: 刘勇 刘建新 康前雁 张殿增 张瑾 田英芳 石秦东 肖新莉 钱亦华
• 来源期刊: 眼科学报
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 视网膜前体细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 54-58
• 页数: 5页
• 分类号: R77
• 字数: 3888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4432.2006.01.011

摘要

目的:研究增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转染人胚胎视网膜前体细胞的转染效率及瞬时表达情况,建立人胚胎视网膜前体细胞的示踪方法,为视网膜前体细胞移植提供示踪依据.方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,通过磷酸钙介导法转染人胚胎视网膜前体细胞,应用流式细胞仪检测其转染效率,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其瞬时表达情况.结果:pEGFP-N1在基因转染24 h细胞转染率为28.98%,48 h为32.45%,72 h为30.40%,对照未转染细胞24 h、48 h分别为2.50%和2.04%;体外观察培养细胞转染24 h已有绿荧光表达,48～72 h细胞荧光强度最强,96 h荧光强度减弱.结论:pEGFP-N1质粒能有效转染人胚胎视网膜前体细胞,其转染效率可达到30%,是人胚胎视网膜前体细胞较为理想的瞬时表达载体和细胞示踪报告分子.