海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建

• 作者: 吉晓佳 周春霖 张大栋 杨永华 汤日圣 王茂文 马鸿翔
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 盐生植物海蓬子 抑制消减抑制杂交 cDNA文库 RNA分离
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 2803字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2006.02.005

摘要

为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量,将改良CTAB法与Tripure 试剂盒方法相结合, 从 300 mg海蓬子发芽后20 d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA.并以无NaCl处理为Driver,以 200 mmol/L NaCl处理 24 h、48 h、72 h的幼苗为Tester,通过cDNA双链的合成及两次PCR扩增,富集到两组处理中差异表达的大小在200～1 300 的cDNA序列,pGEM-T的连接和蓝白斑筛选表明杂交文库滴度和重组率分别达到2.6×107和96%,共收集阳性克隆12 000个, 形成了抑制消减杂交的质粒cDNA文库.随机挑取酶切质粒的电泳分析表明,载体中均有插入片段.两种RNA提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的质量,高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础.