成人视网膜前体细胞的体外分离培养和鉴定

• 作者: 唐仕波 李斌 林少芬 胡洁 马静
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 成人 眼 视网膜前体细胞 细胞培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 519-524
• 页数: 6页
• 分类号: R77
• 字数: 4846字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2006.05.010

摘要

[目的]对成人视网膜前体细胞进行体外分离、培养和鉴定.[方法]成人眼球12只,"机械分离联合酶消化法"分离出睫状上皮层的色素性细胞,10 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+10 ng/mL表皮生长因子(EGF)的无血清DMEM/F12培养液中培养,并从三方面鉴定其神经干细胞特性:A.免疫荧光染色检测神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白Nestin的表达;B.自我更新能力:原代神经球消化传代后,继续培养观察新神经球的形成;C.多向分化潜能:原代细胞培养4～5 d,改用含10 mL/L胎牛血清的DMEM/F12培养液,继续培养7～10 d,分别用抗神经丝蛋白(NF)抗体、抗微管相关蛋白-2(MAP2)抗体、抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、抗视紫质蛋白抗体、抗β-微管蛋白抗体以及抗无长突细胞特异性抗体作免疫荧光细胞染色.[结果]0.48%±0.08%(1:208)原代细胞在含bFGF+EGF无血清培养条件下能保持增殖未分化状态,形成神经球样结构,消化传代后90.1%±8.3%的第二代细胞能重新形成新的神经球样结构,具有自我更新能力;原代及传代后的神经球均表达神经干细胞特异性抗原nestin;在含10 mL/L胎牛血清的促分化培养液中,细胞分别分化为可表达神经细胞、星形神经胶质细胞和感光细胞等特异性抗原的细胞,表明具有多向分化潜能.[结论]在成人眼睫状体扁平部分离得到具有干细胞特性的视网膜前体细胞,并在体外成功进行培养鉴定.