hVEGF165单克隆工程细胞的筛选和鉴定

• 作者: 叶展 李劲松 赵涵芳 陈诗书
• 来源期刊: 外科理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子,人 克隆细胞 基因疗法
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 49-53
• 页数: 5页
• 分类号: R394.8
• 字数: 5435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9610.2006.01.014

摘要

目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌人血管内皮细胞生长因子(hVEGF165)的细胞株,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供有效方法.方法:将含有hVEGF165的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF165导入NIH3T3细胞,使用G-418根据有限稀释法筛选出7个单克隆细胞株.挑选出整合有hVEGF165基因且表达最高的一个细胞克隆在DNA、mRNA和蛋白质水平进行鉴定,同时使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、鸡胚实验检测表达产物的生物学活性.结果:PCR和Southern印迹证明hVEGF165基因已整合入NIH-3T3细胞基因组,RT-PCR和Northern印迹则表明该细胞株能够表达hVEGF165-mRNA.用hVEGF165-ELISA法证实在蛋白质水平该细胞株能够持续表达hVEGF1653个月以上,并始终保持非常高的水平.MTT实验显示其具备较强的促进内皮细胞增殖的功能,而鸡胚实验则表明该工程细胞有很强的促进胚胎血管生成的作用.结论:成功地制备了hVEGF165单克隆工程细胞,为创伤愈合的基因治疗提供实验准备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李劲松	上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室	38	421	12.0	19.0
2	赵涵芳	上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室	17	71	5.0	8.0
3	陈诗书	上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室	3	20	2.0	3.0
4	叶展	上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室	1	2	1.0	1.0