少根根霉(Rhizopus arrhizus)脂肪酶基因在毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 牛卫宁 谭天伟
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 少根根霉 脂肪酶 毕赤酵母 分泌表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2006.02.008

摘要

利用PCR技术从少根根霉中扩增出脂肪酶基因(包括前导序列和成熟肽),并将其连接到酵母分泌表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115.利用抗生素G418从重组阳性克隆中筛选得到高拷贝的转化子.在5 L的发酵罐中,当碳源耗尽后开始流加甲醇诱导脂肪酶的表达,经过96h培养后发酵液上清液中重组脂肪酶(rRAL)的表达量约为90mg/L.rRAL经过超滤,SP-Sepharose离子交换层析和Butyl-Sepharose疏水层析纯化.纯化后的蛋白在SDSPAGE上为单一条带,表观分子量为32 kDa,比酶活为1543 U/mg.N-端序列分析表明rRAL是经过加工后的产物.同时没有发现全长的Rhizopus arrhizus脂肪酶(RAL)被分泌表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭天伟	北京化工大学生命科学与技术学院	314	5281	37.0	56.0
2	牛卫宁	北京化工大学生命科学与技术学院	1	13	1.0	1.0