以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞

• 作者: 张世庆 张学明 李德雪 李恩中 王常勇 王海滨 王静 鲁景艳
• 来源期刊: 动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠 精原干细胞 Sertoli细胞 饲养层
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 观点与方法
• 页码范围: 774-779
• 页数: 6页
• 分类号: Q95
• 字数: 5887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5507.2006.04.020

摘要

为探索精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103 u/ml的白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy-1为标志,对原代培养20 d和传代培养14 d的细胞进行鉴定.该培养体系下,SSCs贴壁时间为6 h-9 h,48 h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12 d以后.接种后第20 d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个.传代后细胞增殖较快.原代培养20 d和传代培养14 d的细胞均为Thy-1阳性;而传代20 d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象.该培养条比较适合SSCs短期快速增殖[动物学报 52(4):774-779,2006].