人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达

• 作者: 刘争红 戴勇 朱莹 李体远 毕晓 陈德珩 黄瑞芳
• 来源期刊: 北京生物医学工程
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素样生长因子 融合蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 420-422,444
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-3208.2006.04.022

摘要

目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.