脐血、外周血内皮祖细胞分化成内皮细胞的实验研究

• 作者: 刘嬿 姜萌 王长谦 聂晓绚 范华骅 邵琴 高跞
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单个核细胞,脐血 血单个核细胞,外周 内皮祖细胞 内皮细胞
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2|R543.3
• 字数: 4714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7236.2006.01.005

摘要

目的探讨人的脐血、外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型和功能.方法新鲜脐血和健康成年人的外周血,使用Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,在M-199培养基中体外培养,3 d后去除悬浮细胞,继续培养,诱导EPCs增殖和分化.流式细胞仪检测EPCs标志CD34和内皮细胞特异性标志CD31表型,RT-PCR检测ecNOS,flk-1/KDR基因水平表达,免疫组化验证蛋白水平表达,并进一步通过NO活性的变化检测内皮细胞的功能.结果流式细胞仪检测,外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)刚分离时,CD34阳性表达率为(1.1±0.8)%,培养3 d后为(16.9±6.2)%.细胞形态观察发现,刚分离的单个核细胞呈圆形,形态小,3 d后有明显集落形成,7 d后梭形细胞线样排列,随培养时间增加,细胞形态逐渐变大,呈现出典型铺路石样改变.脐血单个核细胞(umbilical cord blood mononuclear cells,CBMC)和PBMC培养10 d后,CD31阳性表达率分别为(76±17)%和(82±9)%.RT-PCR检测有内皮细胞特异性成分ecNOS,flk-1/KDR的表达.免疫组化染色,细胞膜和细胞浆中有弥漫性棕色出现,呈阳性反应,证实了蛋白水平的表达.培养10 d的贴壁细胞随着VEGF浓度增加,NO生成增加,具有内皮细胞的功能.结论脐血,外周血EPCs体外分离,纯化,诱导培养后的贴壁细胞表型检测,大部分细胞具有内皮系标志物,并具有产生NO功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长谦	上海交通大学附属仁济医院心内科	92	389	11.0	13.0
2	姜萌	上海交通大学附属仁济医院心内科	32	95	5.0	8.0
3	范华骅	上海血液中心血液工程研究室	10	71	5.0	8.0
4	高跞	上海血液中心血液工程研究室	5	18	3.0	4.0
5	聂晓绚	上海血液中心血液工程研究室	7	48	3.0	6.0
6	刘嬿	上海血液中心血液工程研究室	4	7	2.0	2.0
7	邵琴	上海交通大学附属仁济医院心内科	15	85	5.0	9.0