人角膜上皮细胞Toll样受体介导的炎性细胞因子的表达

• 作者: 吴欣怡 高建鲁
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 上皮,角膜 曲霉菌,烟 膜糖蛋白类 受体,细胞表面 NF-κB 细胞因子类
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 628-633
• 页数: 6页
• 分类号: R77
• 字数: 4848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0412-4081.2006.07.012

摘要

目的探讨人角膜上皮组织和细胞系(THCE)对Toll样受体(TLR)2和TLR4的表达及后者介导THCE对烟曲霉菌(AF)抗原炎性反应的影响.方法用免疫印迹(Western blot)和免疫细胞化学方法检测人角膜上皮组织和细胞系THCE的TLR2和TLR4蛋白质表达与分布;采用自制的AF菌丝体片段(5×106/ml)和培养上清提取物(牛血清白蛋白当量浓度为10μg/ml)抗原,刺激培养的THCE细胞,于刺激1、2、4及8 h收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测白细胞介素(IL)8和肿瘤坏死因子(TNF)α的水平.于刺激后30 min、1及2 h收集细胞,Western blot检测IκBα的表达变化以评价核转录因子κB的活化;采用抗体封闭实验分析封闭TLR2和TLR4对THCE细胞表达IL-8和TNF-α的影响.结果 Western blot和免疫细胞化学结果显示人角膜上皮组织和THCE细胞均表达TLR2和TLR4蛋白质;AF菌丝体或培养上清抗原刺激THCE细胞后,培养上清液中IL-8和TNF-α于1 h后开始升高,至8 h分别达到(64.71±5.15)pg/ml和(32.46±3.28)pg/ml(菌丝体刺激组)及(94.94±11.92)pg/ml和(48.70±3.32)pg/ml(上清刺激组),分别为对照组THCE细胞培养上清中IL-8和TNF-α浓度的3.0倍和2.5倍及4.5倍和3.5倍(均P＜0.01);同时Westernblot检测AF菌丝体和AF上清刺激30 min后THCE细胞的IκBα表达(平均灰度值)分别由对照组的51.57±5.58和49.23±3.49下降为10.31±1.30和8.15±2.37(均P＜0.01),2 h后恢复至对照组水平.在AF菌丝体刺激组,单纯封闭TLR2或TLR4部分抑制THCE细胞IL-8和TNF-α的分泌(均P＜0.05),同时封闭两种受体则明显抑制了IL-8和TNF-α分泌(均P＜0.01);AF上清抗原刺激组,单纯封闭TLR4和联合封闭两个受体均可明显抑制IL-8和TNF-α的分泌(均P＜0.01),而单纯封闭TLR2未明显抑制二者的分泌(均P＞0.05).结论 AF可能经过TLR-NF-κB信号转导通路诱导人角膜上皮细胞表达IL-8和TNF-α等炎性细胞因子.TLR2和TLR4可能介导人眼角膜上皮细胞对AF菌丝体的识别,而对AF上清抗原的识别则可能主要由TLR4介导.